液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物微量雜質(zhì)分析中的應用

液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)聯(lián)用技術(shù)是以HPLC為分離手段、MS為檢測器的綜合分析技術(shù)，集LC的高分離能力與MS的高靈敏度于一體，具有其他分析方法所不能比擬的優(yōu)點(diǎn)，也是藥物雜質(zhì)分析中的常用技術(shù)之一。LC-MS技術(shù)也可以隨時(shí)檢測藥物合成過(guò)程中的中間體、副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物。

在藥物的研發(fā)過(guò)程中，藥品質(zhì)量研究的關(guān)鍵問(wèn)題之一是雜質(zhì)的控制，任何影響藥物純度的物質(zhì)都被稱(chēng)為雜質(zhì)。臨床前CRO公司美迪西的分析化學(xué)和純化分離團隊可以為客戶(hù)提供高質(zhì)量的分析和純化分離服務(wù)。在藥物雜質(zhì)分析中，雜質(zhì)譜的質(zhì)控策略是根據藥物中的每一個(gè)雜質(zhì)的活性逐一制定質(zhì)量控制限度，因此更加嚴格規范。

雜質(zhì)譜分析主要包括2個(gè)方面，一是依據藥物結構、理化性質(zhì)，分析藥物合成工藝、制劑工藝中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)；二是考察藥物穩定性試驗和強制降解試驗產(chǎn)生的雜質(zhì)。因為藥物雜質(zhì)在藥物中的含量較低，所以檢測手段至關(guān)重要，必須選擇靈敏度高、專(zhuān)屬性強、重復性好的方法。

對于易揮發(fā)且熱穩定性的物質(zhì)和殘留溶劑的檢測，一般使用氣相色譜法（GC）。近年來(lái)，色譜法在各國藥典中得到了廣泛應用，其中有關(guān)物質(zhì)分析方法的主流還屬液相色譜技術(shù)。HPLC測定有關(guān)物質(zhì)的定量方法主要有雜質(zhì)對照品法(外標法)、加校正因子和不加校正因子的主成分自身對照法以及面積歸一化法。如采用HPLC法定量測定艾普拉唑片有關(guān)物質(zhì)，并進(jìn)行方法學(xué)驗證。

目前色譜聯(lián)用技術(shù)在藥物雜質(zhì)檢測方面有很大的發(fā)展潛力。人用藥品注冊技術(shù)要求協(xié)調會(huì )（ICH）明確規定：每日大劑量不超過(guò)2g的原料藥中含量大于0.1%的有關(guān)物質(zhì)須鑒定其結構。將色譜法與具有定性能力的光譜法相結合，不僅具有較高靈敏度和選擇性，還能夠給出豐富的結構信息，提高其結構鑒定能力。

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC/MS）技術(shù)主要分為高分辨率質(zhì)譜（HRMS）、多級質(zhì)譜、氫/氘轉換質(zhì)譜3類(lèi)，該技術(shù)具有的靈敏度、高選擇性和快速的特點(diǎn)，避免了樣品復雜的前處理過(guò)程，已經(jīng)成為藥物中微量雜質(zhì)分析和結構鑒定的shou選。

1、HPLC-MS/MS技術(shù)在鹽酸頭孢替安酯藥物雜質(zhì)分析中的應用

采用HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)對鹽酸頭孢替安酯中的未知雜質(zhì)結構進(jìn)行分析，經(jīng)梯度洗脫，使藥物的主成分和相關(guān)雜質(zhì)得到有效分離。通過(guò)對鹽酸頭孢替安酯和有關(guān)雜質(zhì)的液相色譜圖及液相色譜峰對應的質(zhì)譜圖進(jìn)行分析和歸納，推測在鹽酸頭孢替安酯樣品中的主要雜質(zhì)，這為鹽酸頭孢替安酯的生產(chǎn)、工藝改進(jìn)和質(zhì)量控制提供了參考。

2、HPLC/MS聯(lián)用技術(shù)在甲磺酸伊馬替尼藥物雜質(zhì)分析中的應用

采用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)對甲磺酸伊馬替尼中基因毒性雜質(zhì)的含量進(jìn)行測定，并在選擇離子檢測的模式下靈敏、準確、快速地檢測出該基因的毒性雜質(zhì)，但在檢測過(guò)程中,要注意不同溶劑對雜質(zhì)穩定性造成的影響，防止出現假陰性結果。

3、HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)在馬來(lái)酸桂呱齊特原料藥雜質(zhì)分析的研究

采用HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)對馬來(lái)酸桂呱齊特的原料中間體—氯乙酚毗咯烷和一呱嗦乙酚基毗咯烷的含量進(jìn)行測定，考察在馬來(lái)酸桂呱齊特原料中兩種中間體的殘留情況，為特定合成工藝的質(zhì)量控制和質(zhì)量標準的建立提供依據，同時(shí)，也為無(wú)紫外吸收的合成中間體檢測和質(zhì)控提供了參考依據。

4、HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)在原料中雜質(zhì)與制劑中雜質(zhì)的相關(guān)性的研究

在一些原料來(lái)源特殊的制劑質(zhì)量控制中，HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)可較好地分辨原料中雜質(zhì)與制劑中雜質(zhì)的相關(guān)性，為控制制劑質(zhì)量、工藝優(yōu)化和合理貯存提供參考。

如氫嗅酸高烏甲素是從植物中提取的有效成分，在純化過(guò)程中，其可能會(huì )殘留其他生物堿。通過(guò)對氫嗅酸高烏甲素原料藥進(jìn)行分析，發(fā)現其中有種雜質(zhì)主要來(lái)源于原植物的提取殘留。除了注射用粉針劑外，其他注射液均含有原料藥中未出現的降解雜質(zhì)刺烏寧，這可能是由于注射液和葡萄糖注射液在生產(chǎn)工藝中，進(jìn)行了高溫加熱滅菌的緣故，從而導致主成分酯鍵水解斷裂，生成了該降解產(chǎn)物。而注射用粉針劑的凍干工藝則有效避免了該雜質(zhì)的產(chǎn)生，因此該藥在生產(chǎn)和貯存過(guò)程中，應注意避免溫度過(guò)高。

HPLC-MS在藥物雜質(zhì)分析中的應用決定了它是控制藥物質(zhì)量的重要分析工具。運用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行藥物雜質(zhì)分析，能夠為后續的藥物雜質(zhì)分析提供寶貴的經(jīng)驗，值得推廣和應用。